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        液氮冷凍研磨機(jī)提取RNA步驟探討

         更新時(shí)間:2020-05-22 點(diǎn)擊量:2001
           液氮冷凍研磨機(jī)采用電磁撞子研磨技術(shù),將裝有樣品的密閉容器浸入液氮,在超低溫環(huán)境下,利用電磁驅(qū)動(dòng)鋼制撞子往復(fù)撞擊樣品,快速*地粉碎樣品。*的研磨方式相比傳統(tǒng)研磨,研磨時(shí)間更短,研磨樣品更為精細(xì)。
          液氮冷凍研磨機(jī)的設(shè)計(jì)人性化、安全高效、耐用、操作簡單、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好、避免樣品間的交叉污染,適應(yīng)不同客戶的各種需求,是*的“研磨手段”,廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、動(dòng)植物、醫(yī)學(xué)、礦物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。
          液氮冷凍研磨提取RNA該如何進(jìn)行?一起來看看:
          1.用75%酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)、移液槍、槍頭盒、管架進(jìn)行消毒,然后再用RNase Zap擦拭上述材料。
          2.取出-80℃冰箱保存的組織塊,放于用液氮預(yù)冷過的研缽中,敲碎一小塊組織,其余放回凍存管。
          3.加入液氮,先輕輕敲碎組織到小塊,再研磨成粉末,直到看不到組織塊。
          4.加入液氮使粉末凝聚成團(tuán),馬上用藥勺把粉末轉(zhuǎn)移到2.0ml EP管中。
          5.待液氮揮發(fā)干后,加入1ml Trizol裂解液,用1ml移液器將細(xì)胞吹散開,保證細(xì)胞裂解充分,必要時(shí)可借助水平振蕩器混勻。
          6.4℃離心機(jī)12000rpm離心5分鐘,棄沉淀。
          7.加入CHCl3,比例200ul CHCl3/ml Trizol,顛倒混勻,室溫放置15分鐘。
          8.于4℃離心機(jī)12000g離心15分鐘。取上清液,注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。
          9.取上清液,注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。
          10.加入等體積異丙醇,-20℃沉淀1小時(shí)。
          11.于4℃離心機(jī)12000g離心10分鐘。
          12.棄上清,加入1ml 75%酒精漂洗沉淀,于4℃離心機(jī)800g離心5分鐘。必要時(shí)可重復(fù)酒精洗滌。
          13.棄上清,可選擇再次離心去除殘留的乙醇,沉淀在安全柜內(nèi)晾干,切忌過干,只需目測(cè)乙醇揮發(fā)干即可。
          14.根據(jù)沉淀的大小,使用無RNA酶的水將RNA沉淀充分溶解。選擇溶解沉淀的體積,一般為30-100ul。測(cè)RNA濃度,此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。
          15.電泳檢測(cè)RNA完整性,0.5XTBE Buffer,110V電泳30分鐘。
          16.后將沉淀保存在-80℃低溫冰箱。
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